产品货号：
KL00210
中文名称：
通用型RT-LAMP试剂盒(荧光染料法)
英文名称：
Universal RT-LAMP kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒含有荧光RT-LAMP扩增所需的所有成分，可以用于实时荧光RT-LAMP等温扩增。
RT-LAMP即逆转录-环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30～60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性RT-PCR技术，还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
保存：-20℃，有效期1年。
使用方法
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RT-LAMP即逆转录-环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30～60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性RT-PCR技术，还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
- 即开即用，含有LAMP专用的荧光染料，可以进行实时荧光检测（需要荧光PCR仪），但不建议用于定量分析。
- 高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
- 高扩增效率，一般比RT-PCR灵敏一个数量级。
- 65℃左右同时完成逆转录和等温扩增，一步式操作。
- 本试剂盒足够50次20μL体系的实时荧光RT-LAMP扩增。
- 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
- 20μL体系最多可以使用13μL样本，减少漏检。
- 本制品只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| RT-LAMP MasterMix(含荧光染料) | 200μL |
| 逆转录酶-扩增酶混合液 | 100μL |
| 阳性对照模板-引物混合物 | 50μL |
| 超纯水，PCR级 | 1mL |
| 石蜡油，PCR级 | 1.5mL |
保存：-20℃，有效期1年。
使用方法
- 制备模板RNA：用于选用合适的方法制备模板RNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
- 配制20×RT-LAMP引物混合液。
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到0.1mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足够100次20μL体系的RT-LAMP扩增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液体积异于0.1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
注：如果没有Loop引物，则用水替代。引物名称 母液浓度 加母液量 在20×LAMP引物混合液中的浓度 FIP引物 100μM 32μL 32μM BIP引物 100μM 32μL 32μM F3引物 100μM 4μL 4μM B3引物 100μM 4μL 4μM Loop F 100μM 8μL 8μM Loop B 100μM 8μL 8μM 超纯水 12μL 终体积 0.1mL - 在冰上融化RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将100μL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并轻柔颠倒混匀1分钟，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是RT-LAMP扩增阳性对照（PC），一管是RT-LAMP扩增阴性对照（NC）：
成分 N+2个样品管 RT-LAMP扩增PC RT-LAMP扩增NC RT-LAMP MasterMix(已加酶) 6μL 6μL 6μL 自备20×RT-LAMP引物混合液 1μL 不加 1μL 阳性对照模板-引物混合物 不加 4μL 不加 自备模板RNA 1～13μL 不加 不加 自备超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 混匀，放荧光定量PCR仪器上65℃保温90分钟，每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。
- 反应结束后，按下面的步骤处理和分析数据。
- 阈值的设定：LAMP的阈值跟LAMP引物的专一性密切相关，因此新设计的引物需要先在不加模板的情况下进行LAMP扩增，测定其Ct。Ct最好没有，如果有也最好不要低于60（每分钟采集一次荧光信号的话）。如果低于60，则最好重新设计引物。
- 实验有效性的判断：如果阈值设定为60，则样品制备阳性对照和扩增阳性对照的Ct应该在60以内，样品制备阴性对照、无模板阴性对照和无引物无模板阴性对照的Ct应该大于60，否则提取实验或扩增实验无效。对无效的实验不需要分析样品的结果，需要寻找原因或跟我司联系。
- 如果实验有效，则可以分析样品的数据。样品Ct小于阈值则判读为阳性，大于阈值则判读为阴性。
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