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通用型RT-LAMP试剂盒(荧光染料法)图片
产品货号:
KL00210
中文名称:
通用型RT-LAMP试剂盒(荧光染料法)
英文名称:
Universal RT-LAMP kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒含有荧光RT-LAMP扩增所需的所有成分,可以用于实时荧光RT-LAMP等温扩增。


RT-LAMP即逆转录-环介导等温扩增,它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶,在等温条件下(65℃左右) 30~60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性RT-PCR技术,还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测,广泛用于各个领域。


  • 即开即用,含有LAMP专用的荧光染料,可以进行实时荧光检测(需要荧光PCR仪),但不建议用于定量分析。
  • 高特异性,精心优化的配方,非特异扩增比自配的试剂更低。
  • 高扩增效率,一般比RT-PCR灵敏一个数量级。
  • 65℃左右同时完成逆转录和等温扩增,一步式操作。
  • 本试剂盒足够50次20μL体系的实时荧光RT-LAMP扩增。
  • 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。
  • 20μL体系最多可以使用13μL样本,减少漏检。
  • 本制品只能用于科研,不能用于临床。



组分规格
RT-LAMP MasterMix(含荧光染料)200μL
逆转录酶-扩增酶混合液100μL
阳性对照模板-引物混合物50μL
超纯水,PCR级1mL
石蜡油,PCR级1.5mL

保存:-20℃,有效期1年。

使用方法
  • 制备模板RNA:用于选用合适的方法制备模板RNA。如果有N个样品,最好设置N+2个样品制备,多出的两个一个是样品制备阳性对照,一个是样品制备阴性对照。
  • 配制20×RT-LAMP引物混合液。
    先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度,然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水,最后得到0.1mL的20×RT-LAMP引物混合液,此混合液足够100次20μL体系的RT-LAMP扩增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液体积异于0.1mL,则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
    引物名称母液浓度加母液量在20×LAMP引物混合液中的浓度
    FIP引物100μM32μL32μM
    BIP引物100μM32μL32μM
    F3引物100μM4μL4μM
    B3引物100μM4μL4μM
    Loop F100μM8μL8μM
    Loop B100μM8μL8μM
    超纯水12μL
    终体积0.1mL
    注:如果没有Loop引物,则用水替代。
  • 在冰上融化RT-LAMP MasterMix(荧光染料法,待加酶),混匀,稍离心。第一次使用时,请将100μL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并轻柔颠倒混匀1分钟,然后再使用。如果有N个样品,则在N+2个反应管中加入以下组份,多出的一管是RT-LAMP扩增阳性对照(PC),一管是RT-LAMP扩增阴性对照(NC):
    成分N+2个样品管RT-LAMP扩增PCRT-LAMP扩增NC
    RT-LAMP MasterMix(已加酶)6μL6μL6μL
    自备20×RT-LAMP引物混合液1μL不加1μL
    阳性对照模板-引物混合物不加4μL不加
    自备模板RNA1~13μL不加不加
    自备超纯水至20μL至20μL至20μL
  • 混匀,放荧光定量PCR仪器上65℃保温90分钟,每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。
  • 反应结束后,按下面的步骤处理和分析数据。
  • 阈值的设定:LAMP的阈值跟LAMP引物的专一性密切相关,因此新设计的引物需要先在不加模板的情况下进行LAMP扩增,测定其Ct。Ct最好没有,如果有也最好不要低于60(每分钟采集一次荧光信号的话)。如果低于60,则最好重新设计引物。
  • 实验有效性的判断:如果阈值设定为60,则样品制备阳性对照和扩增阳性对照的Ct应该在60以内,样品制备阴性对照、无模板阴性对照和无引物无模板阴性对照的Ct应该大于60,否则提取实验或扩增实验无效。对无效的实验不需要分析样品的结果,需要寻找原因或跟我司联系。
  • 如果实验有效,则可以分析样品的数据。样品Ct小于阈值则判读为阳性,大于阈值则判读为阴性。

相关搜索:通用型RT-LAMP试剂盒(荧光染料法)RT-LAMP MasterMixRT-LAMP试剂盒通用型RT-LAMP试剂盒反转录等温扩增试剂盒逆转录环介导等温扩增试剂盒Universal RT-LAMP kit
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